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免疫治疗对手术后卵巢囊肿研究-文献

  过继免疫治疗对手术后卵巢囊肿患者

  T 细胞及其活化抗原表达影响的研究

  为了观察CIK细胞(cytokine2induced killer) 对手术后卵巢囊肿患者免疫功能恢复的影响,我们运用流式细胞术对40 例手术后卵巢囊肿患者外周血中T 细胞表型及其活化抗原表达的变化进行监测,以探讨CIK过继免疫治疗在临床应用的价值。

  1  材料与方法

  1. 1  检查对象

  选择2003~2004 年期间在我院首次手术治疗并经病理确诊的卵巢囊肿患者40 例,年龄45~68 岁,中位年龄56. 5 岁, 男性32 例,女性8 例。其中肺鳞癌19 例,腺癌15 例,肺泡细胞癌4 例,小细胞癌2 例。均经手术切除肿瘤并清除淋巴结,病理确诊无转移。所有病例观察前未使用激素类药物和免疫抑制剂,并在术前采血检测各淋巴细胞免疫表型,其中20 例手术后患者经CIK治疗3 个疗程,每个疗程10 天,在10 天后同时对两组患者采血检测。随机选择体检健康成年女性20 例作为对照,年龄44~60 岁,中位年龄50 岁。

  1. 2  仪器和主要试剂

  流式细胞仪FACSCalibur ,美国BD 公司产品。本研究使用的双色荧光抗体均是FITC 和PE 标记的鼠抗人的单克隆抗体, 包括CD3/ CD4、CD3/ CD8、CD69、CD25、HLA2DR、IgG1/ IgG1 (同型阴性对照) ,购自深圳达科为生物技术有限公司。CIK细胞由我院肿瘤生物治疗中心提供。

  1. 3  方法

  1. 3. 1  FCM标本的制备

  取肝素抗凝血100μl ,分别加入荧光标记抗体10μl ,振荡混匀后避光20 min ,加入2 ml 溶血素,振荡混匀,溶血10 min ,离心10 min ,用0. 1 mol/ L pH7. 0 PBS 洗涤2 遍,再加入500μl 的PBS 混匀,10 min后上机检测。

  1. 3. 2  FCM检测利用CELLQuest功能软件进行双参数获得数据分析,激光光源15 mW氩离子激光,波长488 nm ,先

  用标准荧光微球对仪器作校对,使半峰变异系数在2 %之内。以前向角散射光对90 度角散射点图确定淋巴细胞群,用门圈出拟测细胞,计数10 000 个细胞,每个标本用同型抗体作自身阴性对照,设立荧光染色阴阳分界线,然后检测CD3、CD4、CD8、CD69、CD25、HLA2DR 阳性表达率。

  1. 4  统计学方法

  所有数据均以平均数和标准差?x ±s 表示,各组之间的数值比较采用两样本均数t 检验。

(责任编辑:admin)
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刘爱国 院长
梅蔚德 教授
姜永健 教授
洪孝英 教授
许伯寿 教授